附录A。规范性附录 细菌定量杀灭试验A.1 试验原理。将规定浓度的细菌悬液以一定比例与酸性电解水混合，作用至规定的时间后加入中和剂。终止酸性电解水的杀菌活性,进行活菌计数 然后与阳性对照组细菌悬液中的菌落数进行比较、以确定其杀菌效果 A。2。悬液定量杀菌试验A。2.1，菌悬液的制备A 2。1、1，按、消毒技术规范，2002年版,要求将细菌繁殖体和枯草杆菌黑色变种芽孢制成2,109CFU。mL。9.109CFU。mL的试验用菌悬液,A,2 1。2、按、消毒技术规范 2002年版，要求将白色念珠菌制成2,108CFU mL、9.108CFU、mL的试验用菌悬液。A,2、2 悬液定量杀菌试验操作程序A,2.2。1。开启生成器.待产生的酸性电解水中有效成分处于稳定状态时，用250mL磨口锥形瓶接取满瓶后 盖好瓶盖、置20。1,水浴备用 A 2，2.2 取消毒试验用无菌大试管、先加入0 05mL试验用菌液,再加入0、05mL有机干扰物质、混匀.置20，1，水浴中5min后，用无菌吸管吸取酸性电解水9,9mL注入其中。迅速混匀并立即计时 A，2,2、3.待试验菌与消毒剂相互作用至各预定时间。分别吸取0。5mL试验菌与酸性电解水的混合液加于含4。5mL中和剂。0、1，硫代硫酸钠,0，1.吐温80的生理盐水,的试管中.混匀，作用10min后.分别吸取1,0mL样液.按活菌培养计数方法测定存活菌数.每管样液接种2个平皿，如平板上生长的菌落数较多时 可进行系列10倍稀释后、再进行活菌培养计数、A,2。2,4。同时用标准硬水代替酸性电解水.进行平行试验,作为阳性对照 A,2。2，5，所有试验样本均在37.温箱中培养.对细菌繁殖体培养48h观察最终结果.对细菌芽孢和白色念珠菌需培养72h观察最终结果.A.2。2。6。试验重复3次，包括对照 计算各组的活菌浓度、CFU。mL、并换算为对数值,N,然后按式 A，1.计算杀灭对数值.A.2.3。杀灭对数值的计算 计算各组的活菌浓度，CFU mL。并换算为对数值 N、然后按式.A.1,计算杀灭对数值,KL。N0.Nx A、1,式中，KL,杀灭对数值，N0,对照组平均活菌浓度的对数值、Nx，试验组活菌浓度对数值、计算杀灭对数值时。取小数点后两位值,可以进行数字修约。但是,如果消毒试验组消毒处理后平均生长菌落数小于1CFU，杀灭对数值即大于或等于对照组平均活菌浓度的对数值。KL，lg，N0.A 2、4，评价规定.取酸性电解水原液与3个作用时间,重复试验3次、在最短作用时间。以及最短作用时间的1。5倍时.对大肠杆菌.金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 枯草杆菌黑色变种芽孢.各次试验的杀灭对数值均 5,00,对白色念珠菌。各次试验的杀灭对数值均、4 00.判定为消毒合格。A，2 5 注意事项A。2,5、1,试验中所使用的中和剂 稀释液和培养基等。各批次均应进行无菌检查。发现有菌生长,则全部试验需换用未污染试剂或培养基重做.A.2。5、2.进行细菌液定量杀菌试验时,对用于清洗物品的消毒或用于冲洗浸泡消毒 有机干扰物质采用0、3、3g,L.牛血清白蛋白。对未清洗的物品或有机物较多的物品的消毒.有机干扰物采用3 30g、L,牛血清白蛋白,