附录A,规范性附录 细菌定量杀灭试验A 1。试验原理.将规定浓度的细菌悬液以一定比例与酸性电解水混合。作用至规定的时间后加入中和剂、终止酸性电解水的杀菌活性、进行活菌计数。然后与阳性对照组细菌悬液中的菌落数进行比较.以确定其杀菌效果 A、2.悬液定量杀菌试验A，2.1、菌悬液的制备A 2，1.1,按 消毒技术规范，2002年版 要求将细菌繁殖体和枯草杆菌黑色变种芽孢制成2 109CFU,mL，9 109CFU、mL的试验用菌悬液,A、2、1、2,按.消毒技术规范。2002年版、要求将白色念珠菌制成2。108CFU.mL.9、108CFU，mL的试验用菌悬液 A、2,2 悬液定量杀菌试验操作程序A，2 2.1,开启生成器.待产生的酸性电解水中有效成分处于稳定状态时，用250mL磨口锥形瓶接取满瓶后.盖好瓶盖.置20 1，水浴备用.A 2 2,2。取消毒试验用无菌大试管。先加入0,05mL试验用菌液.再加入0，05mL有机干扰物质 混匀。置20、1 水浴中5min后。用无菌吸管吸取酸性电解水9、9mL注入其中.迅速混匀并立即计时，A 2 2、3,待试验菌与消毒剂相互作用至各预定时间、分别吸取0、5mL试验菌与酸性电解水的混合液加于含4 5mL中和剂、0.1，硫代硫酸钠、0.1。吐温80的生理盐水。的试管中,混匀,作用10min后,分别吸取1.0mL样液 按活菌培养计数方法测定存活菌数。每管样液接种2个平皿.如平板上生长的菌落数较多时，可进行系列10倍稀释后，再进行活菌培养计数。A。2。2。4、同时用标准硬水代替酸性电解水、进行平行试验 作为阳性对照。A。2,2,5.所有试验样本均在37、温箱中培养。对细菌繁殖体培养48h观察最终结果，对细菌芽孢和白色念珠菌需培养72h观察最终结果 A,2,2，6.试验重复3次 包括对照，计算各组的活菌浓度,CFU。mL.并换算为对数值,N.然后按式 A、1 计算杀灭对数值，A、2，3，杀灭对数值的计算，计算各组的活菌浓度、CFU，mL.并换算为对数值。N 然后按式.A,1，计算杀灭对数值，KL。N0.Nx，A 1.式中.KL、杀灭对数值。N0。对照组平均活菌浓度的对数值、Nx，试验组活菌浓度对数值 计算杀灭对数值时,取小数点后两位值,可以进行数字修约.但是.如果消毒试验组消毒处理后平均生长菌落数小于1CFU。杀灭对数值即大于或等于对照组平均活菌浓度的对数值,KL，lg，N0、A。2,4。评价规定、取酸性电解水原液与3个作用时间、重复试验3次，在最短作用时间.以及最短作用时间的1、5倍时，对大肠杆菌,金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌,枯草杆菌黑色变种芽孢.各次试验的杀灭对数值均 5,00、对白色念珠菌.各次试验的杀灭对数值均。4。00。判定为消毒合格,A.2、5 注意事项A.2.5，1 试验中所使用的中和剂、稀释液和培养基等、各批次均应进行无菌检查，发现有菌生长.则全部试验需换用未污染试剂或培养基重做 A、2,5，2。进行细菌液定量杀菌试验时。对用于清洗物品的消毒或用于冲洗浸泡消毒 有机干扰物质采用0,3,3g，L、牛血清白蛋白.对未清洗的物品或有机物较多的物品的消毒.有机干扰物采用3 30g.L,牛血清白蛋白.