附录A。规范性附录，灭菌效果检测方法A，1，方法原理。本试验以常见的硬式镜不锈钢材料管腔,软式镜聚四氟乙烯材料管腔为模拟管腔，验证微生物的灭菌效果 本试验应采用两端开口的无缝测试管腔.如有接缝 则应保证气密性。在管腔中央放置染有细菌芽孢的载体、通过半周期灭菌循环,无菌生长，以嗜热脂肪杆菌芽孢为指标菌、同时进行微生物灭菌效果评价。所有试验均为阴性培养结果，则判定结果合格.A 2.生物指示物.嗜热脂肪杆菌芽孢,ATCC7953、A。3,验证器材A 3、1.载体。将芽孢液均匀涂布在直径为0、4mm.长度为20mm,30mm不锈钢检测材质上。以染菌后不堵塞管腔为限。嗜热脂肪杆菌芽孢阳性回收菌量应为1、106CFU。载体、5 106CFU,载体.室温下自然干燥后再使用。A 3.2。检测管腔。本试验宜采用两端开口的无缝测试管腔。如有接缝、则应保证气密性、A,3。3。不锈钢材质无接缝管腔 10根、A,3,4,聚四氟乙烯无接缝管腔.10根,A。3，5。嗜热脂肪杆菌芽孢的TSB培养基、干粉胰蛋白胨17.0g 植物蛋白胨3，0g,氯化钠5.0g、磷酸氢二钾2、5g.葡萄糖2，5g.共30g溶于1L蒸馏水中，制成胰蛋白胨大豆肉汤，TSB，培养基.A.4，操作步骤A,4 1,将染菌的载体送达不锈钢管腔的正中央 制作10根测试样本.将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内,用双层无纺布包裹，放置在灭菌舱内.灭菌舱内如仅一层隔架，则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央,见图A,1、若灭菌舱内可摆放上下两层隔架.则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内、分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央.见图A、2。按照，消毒技术规范，2002版.中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌 灭菌结束后以无菌操作取出细菌芽孢载体。均放到TSB培养基中、56 培养48h,观察培养结果，如无细菌生长则继续培养至7d 培养结果仍无细菌生长则判断为阴性、A.4，2、将染菌的体用细丝送达聚四氟乙烯管腔的正中间.制作10根测试样本，将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内。用双层无纺布包裹,放置在灭菌舱内，灭菌舱内如仅一层隔架。则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央，见图A。3，若灭菌舱内可摆放上下两层隔架，则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内 分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央.见图A，4、按照,消毒技术规范,2002年版.中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌 灭菌结束后取出细菌芽孢载体、全部放到TSB培养基中,56,培养48h,观察培养结果如无细菌生长则继续培养至7d 培养结果仍无细菌生长则判定阴性.A、5,结果计算。嗜热脂肪杆菌芽孢重复以上两种材质的模拟管腔 微生物测试各重复5次。A,6、结果判定,测试结果均无细菌生长 为阴性，则判定无菌合格.