附录A，规范性附录.灭菌效果检测方法A,1.方法原理,本试验以常见的硬式镜不锈钢材料管腔,软式镜聚四氟乙烯材料管腔为模拟管腔 验证微生物的灭菌效果 本试验应采用两端开口的无缝测试管腔.如有接缝，则应保证气密性,在管腔中央放置染有细菌芽孢的载体 通过半周期灭菌循环.无菌生长，以嗜热脂肪杆菌芽孢为指标菌，同时进行微生物灭菌效果评价、所有试验均为阴性培养结果.则判定结果合格。A，2，生物指示物 嗜热脂肪杆菌芽孢、ATCC7953。A 3，验证器材A，3,1、载体.将芽孢液均匀涂布在直径为0.4mm,长度为20mm，30mm不锈钢检测材质上 以染菌后不堵塞管腔为限，嗜热脂肪杆菌芽孢阳性回收菌量应为1,106CFU。载体、5，106CFU 载体、室温下自然干燥后再使用,A 3。2、检测管腔.本试验宜采用两端开口的无缝测试管腔 如有接缝.则应保证气密性、A。3、3、不锈钢材质无接缝管腔、10根,A,3。4.聚四氟乙烯无接缝管腔，10根,A,3、5,嗜热脂肪杆菌芽孢的TSB培养基。干粉胰蛋白胨17。0g,植物蛋白胨3。0g.氯化钠5 0g。磷酸氢二钾2。5g。葡萄糖2 5g。共30g溶于1L蒸馏水中。制成胰蛋白胨大豆肉汤、TSB，培养基,A.4.操作步骤A，4.1 将染菌的载体送达不锈钢管腔的正中央。制作10根测试样本，将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内 用双层无纺布包裹、放置在灭菌舱内。灭菌舱内如仅一层隔架，则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央 见图A。1，若灭菌舱内可摆放上下两层隔架、则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内、分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央。见图A。2、按照、消毒技术规范.2002版。中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌，灭菌结束后以无菌操作取出细菌芽孢载体 均放到TSB培养基中 56。培养48h，观察培养结果,如无细菌生长则继续培养至7d 培养结果仍无细菌生长则判断为阴性.A，4。2.将染菌的体用细丝送达聚四氟乙烯管腔的正中间。制作10根测试样本,将10根测试样本均匀平行摆放在器械盒内 用双层无纺布包裹.放置在灭菌舱内.灭菌舱内如仅一层隔架、则10根样本平行摆放在器械盒内放置在灭菌舱中央、见图A、3，若灭菌舱内可摆放上下两层隔架。则将10根样本均匀摆放在两个器械盒内 分别放置在灭菌舱内上下两层隔架中央。见图A,4,按照 消毒技术规范，2002年版,中的灭菌操作步骤进行半周期灭菌 灭菌结束后取出细菌芽孢载体,全部放到TSB培养基中,56、培养48h，观察培养结果如无细菌生长则继续培养至7d。培养结果仍无细菌生长则判定阴性,A，5、结果计算.嗜热脂肪杆菌芽孢重复以上两种材质的模拟管腔、微生物测试各重复5次，A,6。结果判定、测试结果均无细菌生长,为阴性，则判定无菌合格,