E,8 悬浮微生物的检测E。8。1 悬浮微生物的采样装置有以下两类。1，采用无源采样装置、如培养皿.2 采用有源采样装置，如撞击采样器、离心采样器.过滤采样器 E.8、2,空气洁净环境中悬浮微生物的静态或空态检测前 应对各类表面进行擦拭消毒 但不得对室内空气进行熏蒸、喷洒之类的消毒 动态检测均不得对表面和空气进行消毒，E,8 3、沉降菌检测应符合下列要求、1。使用直径90mm、Φ90，的培养皿采样、当采用其他直径培养皿时.应使其总面积和Φ90皿总面积相当。2，培养皿中灌注胰蛋白酶大豆琼脂培养基、必须留样作阴性对照 3、培养皿表面应经适当消毒清洁处理后.布置在有代表性的地点和气流扰动极小的地点。在乱流洁净室内培养皿不应布置在送风口正下方.4、当用户没有特定要求时 培养皿应布置在地面及其以上0，8m之内的任意高度。5 每一间洁净室或每一个控制区应设1个阴性对照皿、6。动态监测时也可协商布点位置和高度、7、培养皿数应不少于微粒计数浓度的测点数、如工艺无特殊要求应大于等于表E、8、3中的最少培养皿数.另外各加1个对照皿。8 当延长沉降时间时.可按比例减少最少培养皿数.为防止脱水、最长沉降时间不宜超过1h。当所需沉降时间超过1h.可重叠多皿连续采样,除非经过验证 证明更长的沉降时间可以基本按比例增加菌落数.9，培养皿应从内向外布置 从外向内收皿，10,每布置完1个皿。皿盖只允许斜放在皿边上 对照皿盖挪开即盖上,11、布皿前和收皿后。均应用双层包装保护培养皿、以防污染，12,收皿后皿应倒置摆放 并应及时放入培养箱培养，在培养箱外时间不宜超过2h,如无专业标准规定,对于检测细菌总数。培养温度采用，35 37.培养时间为,24.48 h 对于检测真菌,培养温度.27,29。培养时间3d 13，布皿和收皿的检测人员必须穿无菌服、但不得穿大褂，头 手均不得裸露。裤管应塞在袜套内,并不得穿拖鞋，14.对培养后的皿上菌落计数时.应采用5,10倍放大镜查看 若有2个或更多的菌落重叠.可分辨时则以2个或多个菌落计数 15.当单皿菌落数太大受到质疑时,可按以下原则之一进行处理。1,作为坏点剔除,2,重测，如结果仍大、以两次平均值为准 如结果很小,可再重测。3。重测该处微粒浓度.参考此结果作出判断、所有上述处理方法均应记录在案 16，每皿平均菌落数取到小数点后1位 17、动态监测时每点叠放多个平皿或采用可自动切换的仪器、每点应采满4h以上 每皿可采30min、当只放1个皿时、可少于4h 但不可少于1h E。8.4，浮游菌采样应符合下列要求、1.使用单级或多级撞击式采样器.离心采样器或过滤采样器，采样必须按所用仪器说明书的步骤进行,特别要注意检测之前对仪器消毒火菌,并对培养皿或培养基条做阴性对照,2,采样点数应不少于微粒计数浓度测点数 3、采样点应在离地0,8m高平面上均匀布置，或经委托方,用户、与检测方协商确定。乱流洁净室内不得在送风口正下方布点，静态或空态检测前对室内各种表面应作擦拭消毒、4,每点采样1次.如工艺无特殊要求.每次采样量应大于等于表E。8，4推荐的浮游菌最小采样量,每次采样时间不宜超过15min、不应超过30min。当洁净度很高,或预期含菌浓度可能很低时、采样量应大于最小采样量很多,以满足减少计数误差的要求、5。采样器应用支架固定。采样时检测人员应退出 手持离心式采样器除外，检测人员的穿戴同本附录E.8、3条第15款,必须手持采样器时。应将手臂伸直、站于下风向。6。采样后宜在2h之内将采样器中的培养皿或培养基条送入培养箱中培养，7、每点平均值取到小数点后1位,8、动态监测的测点位置 数量和高度由工艺并经协商确定，每间洁净室或每一个独立受控环境中各点总采样量、不分级别,均应大于1m3.每点可用多台采样器，9。单点菌落数太大时、应按附录E.8,3条第15款的原则处理,E。8，5 表面染菌密度检测应符合下列要求。1,对于洁净室内围护结构。设备等表面的微生物采样,应采用无菌棉拭子擦抹法。当表面很大.硬且平时.也可采用接触皿法,2,用规格板标定出面积为25cm2的区块，对于围护结构,每面结构不少于4块,对于设备,每件不少于2块 取样地点均协商确定 3，将无菌棉拭于含10mL稀释液试管中浸湿,于管壁上挤干后.对一区块擦抹采样，横竖往返8次。每一区块使用1根无菌棉拭 采样后 以无菌操作方式将棉拭采样端剪入原稀释液试管中。经电动混匀器震荡20s或在手掌振打200次.4.取含菌液体1，0mL,以琼脂灌注法接种平皿，每个样本接种2个平皿。于，35，37，培养箱中培养.24，48.h后计数,5 必须将本次检测所用的稀释液，棉拭子，培养基等留样作阴性比照，6。具体事项遵照卫生部、消毒技术规范。执行，7 对于适用接触皿采样的表面，以无菌操作方式。先将培养基注入硬质或软质Φ55平皿。使培养基表面高出培养皿周边、测试时。将培养皿倒过来 使培养基表面均匀牢固地按压住整个区域5s.不得有环形或线性的运动 8,对于围护结构 每面结构应用不少于4个培养皿按压，对于设备、每件用不少于2个培养皿按压、9，按压取样后的培养皿 应在2h之内.于,35、37、培养箱中培养 24、48.h后计数.10，菌数平均数取到小数点后1位